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破壁机在胞内分枝杆菌破壁制备上的应用

更新时间:2022-10-24 09:54:33 人气指数:
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引言:分枝杆菌属( Mycobacterium)是一类细长略弯曲的杆菌,因有分枝生长的趋势而得名。细胞壁含有大量脂质,主要是分枝菌酸,一般不易着色,若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色,故又称抗酸杆菌,且不易破壁。本次实验ATS破壁机将样品做两部分处理,对比破壁结果。

实验对象 
胞内分枝杆菌

实验仪器
高速离心机
ATS破壁机
显微镜

实验背景
分枝杆菌属( Mycobacterium)是一类细长略弯曲的杆菌,因有分枝生长的趋势而得名。本菌属的显著特性为:①细胞壁含有大量脂质;②无鞭毛、无芽胞,也不产生内、外毒素;③对人致病的主要有结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、麻风分枝杆菌;④所致感染多为慢性过程,长期迁延并有破坏性的组织病变。

实验难点
细胞壁含有大量脂质,主要是分枝菌酸,一般不易着色,若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色,故又称抗酸杆菌,且不易破壁

实验目的
将胞内分枝杆菌进行破壁,后续提取蛋白。

实验工艺
1.预处理:将灭活后的胞内分枝杆菌液体(非结核)分为两部分,一部分不作处理;一部分做碱处理,离心后去上清加水再重悬。
2.实验工艺:ATS破壁机搭配一级模块后,控低温处理。

实验结果
A.未处理的菌液破壁结果
通过对菌液进行抗酸染色后观察,破壁前菌液呈紫色,在破壁次数相同的条件下,随着压力的增高,胞内分枝杆菌颜色偏向蓝色。
 

破壁机在胞内分枝杆菌破壁制备上的应用

100倍油镜显示,压力越高,破壁效果越好。(压力排序:A<B<C<D)破壁机在胞内分枝杆菌破壁制备上的应用

破壁前

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破壁机在胞内分枝杆菌破壁制备上的应用破壁机在胞内分枝杆菌破壁制备上的应用

破壁后

B.碱处理菌液破壁结果
同压力同次数下,碱处理后的菌液破壁效果明显提高。

破壁机在胞内分枝杆菌破壁制备上的应用   破壁机在胞内分枝杆菌破壁制备上的应用

           (碱处理)                                              (未处理)

实验小结
1.从染色结果和显微镜观察结果可以看出,未处理的菌液经不同压力处理后,都有一定程度的细菌破壁,且压力越高,破壁效果越好。
2.碱处理有助于破壁,比同压力未处理的菌液破壁结果更好,细胞更细碎。

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